生物显微镜：选用 ISO 8037-1 标准载玻片适配机型，校准目镜（10×）、物镜（4×/10×/40×/100× 油镜）、光源亮度与聚光器中心，确保光路同轴、无杂光。
切片机：石蜡切片机校准刀距，刀片锋利无缺口，切片厚度精度控制在 ±0.5μm。
辅助设备：通风橱（二甲苯操作必备）、37℃烘片台、染色缸、恒温干燥箱。
载 / 盖玻片：ISO 8037-2 标准，厚度 1.0–1.2mm，无划痕、无油污。
固定液：4% 中性缓冲甲醛（10% 福尔马林），固定 24–48h，组织体积比≥1:5。
脱水剂：梯度乙醇（70%→80%→90%→95%→100%）。
透明剂：二甲苯（无水乙醇：二甲苯 = 1:1 过渡）。
染色液：苏木精 - 伊红（HE），细胞核蓝染、细胞质红染。
取材：组织块≤0.5cm 厚、1–1.5cm²，取典型区域，避免坏死边缘。
固定：立即浸入 4% 中性甲醛，25℃固定 24–48h，固定液体积为组织 5–10 倍，防止自溶变形。
梯度脱水（25℃）：70% 乙醇 1h→80% 乙醇 1h→90% 乙醇 1h→95% 乙醇过夜→无水乙醇 2h×2，逐步脱水防收缩。
透明：1:1 乙醇二甲苯 30min→二甲苯 30min→二甲苯 1h，至组织透明无白色浑浊。
浸蜡：60℃石蜡 1h×3，确保石蜡完全渗透组织，无气泡。
包埋：将浸蜡组织放入包埋框，注入熔融石蜡，冷却凝固成蜡块。
切片：切片机切 4–5μm 薄片（最佳观察厚度，细胞无重叠），展片于 45℃水浴，贴附载玻片，37℃烘片过夜。
脱蜡：二甲苯 10min×2→无水乙醇 5min×2→95% 乙醇 5min→80% 乙醇 5min→自来水冲洗。
核染色：苏木精染 3–8min→自来水冲洗→1% 盐酸乙醇分化数秒→0.6% 氨水返蓝→流水冲洗 10–15min。
质染色：伊红染 1–3min→自来水冲洗 2–5min。
脱水封片：95% 乙醇 5min×2→无水乙醇 5min×2→二甲苯透明→中性树胶封片，避免气泡。
切片置于载物台，标本夹固定，对准通光孔。
旋转物镜至 10×，调节反光镜 / LED 光源，视野明亮均匀。
粗调焦下降镜筒至物镜距玻片约 0.5cm，缓慢上升至出现模糊影像，细调焦至清晰，移动载物台找到目标组织区域。
低倍镜下目标移至视野中心，直接转 40× 物镜（弹簧保护，防压片）。
细调焦微调，调节光圈 / 聚光器，增强对比度，观察细胞轮廓、核质比、组织排列。
高倍镜定位后，移开物镜，盖玻片滴 1 滴香柏油（ISO 8036 标准浸油）。
缓慢下降镜筒，油镜浸入油滴，细调焦至清晰，观察细胞核仁、线粒体、染色质等亚细胞结构。
观察后：擦镜纸蘸无水乙醇清洁油镜，去油后复位。
正常细胞：形态规则、边界清晰、核质比正常、染色均匀。
异常细胞：大小不均、核大深染、核质比升高、排列紊乱（病理 / 检测核心判断点）。
切片厚度：4–5μm，均匀无褶皱、无刀痕。
染色：核蓝、质红，对比清晰，无过染 / 浅染、无背景杂质。
观察：细胞结构完整、无收缩变形、无气泡干扰。
问题 | 原因 | 解决方法 |
切片褶皱、破碎 | 脱水过度、石蜡温度过高、刀片钝 | 梯度脱水控时、60℃浸蜡、更换新刀片 |
染色模糊、背景深 | 脱蜡不净、染液氧化、分化不足 | 二甲苯新鲜、苏木精过滤、延长分化时间 |
油镜视野模糊 | 香柏油杂质、物镜未擦净、调焦过快 | 用新鲜香柏油、乙醇擦镜、缓慢细调焦 |
细胞收缩变形 | 固定不及时、脱水过快 | 取材立即固定、梯度乙醇逐步脱水 |
生物显微镜组织切片制作与细胞观察，核心是标准化制片 + 规范显微操作 + 严格质控。从 ISO 标准耗材、精准试剂配比，到 4–5μm 切片厚度、HE 染色细节，再到低→高→油镜的观察逻辑，每一步都决定实验结果可靠性。科研、检测、教学场景中，熟练掌握全流程，可高效获取清晰细胞形态数据，支撑实验结论与质量判定。
ISO 8037-1:1986 显微镜载玻片尺寸与光学性能标准，2025 年 9 月
ISO 8037-2:1997 显微镜载玻片材料与包装标准，2002 年 11 月
成都医学院基础医学实验教学示范中心《病理制片技术手册》，2026 年 4 月
东极生物《病理实验步骤与 HE 染色规范》，2025 年 11 月
健康界《HE 染色实用技巧与质量控制》，2026 年 5 月
上海长方光学仪器有限公司
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